第十八章 “烟酒僧”Routine（七）19（2 / 2）
首先需要进行分子鉴定，即提取该突变体基因组DNA，经PCR扩增后，将克隆产物送至生物公司进行测序，可明确该样品是否为突变体，并确认其突变位点信息。
由于基因的表达，通常包括DNA向mRNA的“转录”，以及mRNA“翻译”为蛋白质的过程。因此，该突变体DNA的改变，会在多大程度上影响后续的“转录”和“翻译”效果，需要进一步验证。
最后，还需辅助突变体的各类表型观察。其中最显而易见的，便是对比该突变体与正常的野生型个体，查看两者是否存在肉眼可见的“外貌”差异。
“提取斑马鱼基因组DNA，可以用成鱼的尾鳍。”钱余给魏泺做起了介绍，“将成鱼进行麻醉以后，再将尾鳍切下，不过该成鱼后续啊，需要进行单尾隔离饲养。”
“而斑马鱼突变体的突变基因表达水平，还需分别用整体原位杂交技术检测mRNA表达，Westernblot检测蛋白丰度。”
“那你这……”魏泺看了看钱余摆在桌上的样品，继续说道，“应该也做了不少突变体的蛋白鉴定了吧？”
“还有一些是‘转基因鱼’的蛋白样品，我干脆也一块儿做鉴定了。”
这时顺际宁走进了实验室，看到仅钱余一个人，就“霸占”了好几个电泳槽——这工作量可真是够呛。
他不禁感慨道：“要是上学期期末的时候，实验室没有买这台‘化学发光成像仪’啊，尹老师现在看到你这一排排的样品，估计会感觉‘无比肉疼’。”
“为啥呀？”魏泺感到很疑惑，“不就是多跑了几个样品嘛！”
钱余笑着回答：“师兄说的不是这些电泳槽，而是指‘显影’的方式。”
“这‘化学发光成像仪’啊，自带了‘CCD拍照成像系统’，可连接电脑，运用配套软件进行Western显影操作，如今深受科研人员的喜爱。”顺际宁解释道，“不过这传统的显影方式呢，用的则是‘X-光胶片’。”
“化学发光”的原理其实也很简单，目前Western最常用的“化学发光底物”是辣根过氧化物酶HRP。通用的商业抗体“二抗”通常以HRP标记，当完成抗体孵育、进行显影之前，需要在“印迹纸”上加入“化学发光液”——其中A液为“鲁米诺”，又称“发光氨”；B液为“过氧化氢”。此二者混合后，再与结合了HRP标记抗体的“印迹纸”一起孵育，产生化学反应而生成的反射光，可以在425nm条件下，通过“X-光胶片”或者“化学发光成像仪”采集图像。
魏泺想了一会儿，开口道：“我记得课本里有介绍过，好像需要什么‘X-光片夹’，然后‘曝光’什么的。但具体的操作嘛……”
“那你有没有‘冲洗’过照片呀？”顺际宁又问魏泺，“就是最传统的、用‘黑白胶卷’冲洗的那种照片。”
魏泺摇了摇头：“没有，我只在电影和电视剧里看到过。大概是……要进到一间不透光的屋子，貌似叫什么‘摄影暗房’之类的。”
顺际宁抬起右手，朝门外指了指：“看到转角的那间‘暗室’了吗？”
魏泺转过头一看，又接着点了点头，问道：“那不是‘杂物房’么？刚开学的时候，我帮实验室管理员搬旧书，还进去过一次。那里面‘乌漆嘛黑’的，墙壁都涂黑了，而且还铺了一层厚厚的报纸——简直就是一间‘小黑屋’嘛！”
“那就是我们实验室之前，用来进行显影的‘暗房’啊。”顺际宁进一步介绍道，“将Western的‘印迹纸’加入‘化学发光液’之后，便将其收入到‘X-光片夹’中，带入暗房内。在黑暗环境下，将‘X-光胶片’置于‘印迹纸’上进行‘曝光’，时间自定。到点之后呀，就将该‘X-光胶片’迅速没入‘显影液’中显影，待有条带出现后，再浸入‘定影液’中，最后放入清水中洗去残留液体，就大功告成啦！”
钱余补充道：“其实跟‘冲洗照片’是一样的，就是简单的‘曝光’、‘显影’、‘定影’、‘水洗’这几步。不过呢，不需要像‘洗胶卷’那样，将其进行‘放大’处理。”
钱余刚进实验室那会儿，大伙用的都是‘X-光胶片’，所以每次显影，他都必须把自己“关进暗房里”。
“其实两种‘显影方式’都是可行的，只不过传统的‘X-光胶片’显影，需要自行控制曝光时间。不像现在的这台‘化学发光成像仪’，在‘化学发光液’作用的有效时限内，通过调整‘显影系统’的曝光时间梯度，可得出数张不同时间的曝光蛋白图，供科研人员随意选择并储存，若是曝光时间不理想，还能再次进行调整。只要‘化学发光作用’尚未‘淬灭’，可以随时调整曝光时间，直到令你满意为止。”
顺际宁继续说道：“可是这传统的显影方法，那就没这么‘自动化’了。每次显影，我们都是要随身带着‘计时器’的。特别是刚开始的时候，手生得很，一张片子大概需要曝光多久，都需要我们慢慢地摸索经验——蛋白的上样量、转膜效果、抗体的效价等，都决定了曝光的时间长短。信号强的话，所需的曝光时间就短，若是稍微多了几秒钟，那显影后得到的蛋白图啊，就是‘黑糊糊’的一片，别提有多难看了。”
“我们实验室用的一直都是佳能的‘X-光胶片’，那东西可不便宜啊。每次实验通常先‘压片’曝光一张，若是效果不佳，那就只能‘再接再厉’了。你看你师兄今天‘跑’了这么多个电泳槽子，要是有那么几张需要重新‘曝光’的话，那这一盒‘X-光胶片’啊，可就要用去了‘小一半’咯。”
钱余听了顺际宁的调侃，也无奈地自嘲道：“确实是啊，要是我再‘手残’一点，尹老师估计会是‘滴血的心在地上打滚’的状态。”
三人都默默地笑了。
“你和柳沅算是赶上‘好时候’了，现在‘显影’啊，再也不用被关进‘小黑屋’里咯……”