第十三章 “烟酒僧”Routine（二）（2 / 2）

“嘿嘿……”两人也不好意思地笑了——这不是低年级的都叫顺口了，一时也改不回来咯。

陈幸倒不是很介意，反而继续说起了细胞培养的注意事项：“先将水浴锅预热至37℃，将无菌的培养瓶、离心管、吸管等放入生物安全柜中，经紫外线照射30分钟，并用75%的酒精擦拭台面。”

师妹埋头记录，不一会儿就抬头问道：“我记得之前实验课教过，‘悬浮型’细胞可直接分瓶，若有细胞‘贴壁’，则需先用胰酶消化……不知道这个MCF-7细胞传代，具体怎么操作呀？”

“这MCF-7细胞呀，是从一位69岁白人女性乳腺癌患者的胸腔积液中得到的，具有已分化的乳腺上皮特性，所以正常情况下，它是上皮细胞样、贴壁生长，属于乳腺肿瘤干细胞，理论上能够自我更新、无限增殖。”

陈幸继续说道：“其实在各类乳腺癌细胞中，MCF-7算是一种生长缓慢的细胞系。在我们实验室的体系里，通常呀，复苏后前2代的细胞贴壁比较慢——大概需要5至7天，才能增殖到符合传代的密度。MCF-7前期形成松散的‘三维团簇结构’，然后逐渐生长为扁平的单层细胞。这期间会出现少许悬浮的活细胞，需要进行离心操作，将其回收培养。”

“MCF-7细胞在培养36至72小时内迅速增殖，到了第3代往后，传代周期大概是3至4天，通常最快一周可传代两次。所以呢，差不多每周更换两到三次培养液，平均每3天换一次。”

“我们养细胞用的是‘完全培养基’——这些你们在课上都学过了吧，就是在含有基础营养物质的培养基里再加入牛血清、抗生素等物质。MCF-7细胞的培养液里至少含有10%的血清，每毫升培养液中还加入了0.01毫克的人重组胰岛素……”

就这1周至少传1代的频率，就算是“生长缓慢”的了，那生长快的细胞要“高速”成啥样？难怪钱余的室友——帅小伙是如此地羡慕。

“今天做的这一批，已经是第4代了。”陈幸开始讲起了操作，“先将培养基、PBS缓冲液、胰酶放入水浴锅，通通预热至37℃。”

“你们的值日表也排出来了吧？”陈幸插了一句嘴，“每周的值日生要负责配试剂，不可以偷懒哦。”

试剂配制包括实验使用的灭菌蒸馏水、各种缓冲液、抗生素溶液、酶溶液的制备等，若有材料、试剂短缺，必须及时通知管理员订购。值日人员还要打扫卫生，保证实验环境良好……其中最重要的当属各类试剂的制备——值日生必须尽职尽责，保证每一位实验人员都能用得放心。

几分钟后，陈幸用75%的酒精消毒了双手，点燃安全柜内的酒精灯。然后将水浴锅中预热好的试剂拿出，均匀地喷洒上酒精，再移入安全柜中放置。再次消毒双手，陈幸彻底进入安全柜工作区，便开始传代实验：

她先用吸管吸走旧培养瓶中MCF-7细胞的培养液，加入PBS缓冲液清洗两次，再吸去润洗的PBS，接着陈幸往瓶中加入胰酶，充分接触细胞表面。

师弟师妹站在陈幸身后，对应着她笔记中的要点，认真观察她的每一步操作：

“MCF-7细胞传代——消化法：

PBS洗涤细胞10～20秒，动作要小心、轻柔，全面清洗。

胰酶消化要充分，静置1～2分钟后，显微镜观察细胞形态。

细胞回缩、变圆、离散、有脱落趋势，加培养液终止消化。”

过了一会儿，陈幸便用‘倒置显微镜’观察细胞的消化情况。待时机成熟，她立即加入培养基，与胰酶混匀，再吸走混合液。

接着，陈幸换了新的吸管加入培养液，使细胞悬浮，然后离心。弃上清液后，再次加培养基悬浮细胞，混匀，最后便可进行分瓶培养。

师弟对照笔记中的重点，也在自己的小本子里记录着：

“制细胞悬液不可产生气泡；

离心时要保证离心机平衡；

通常以1:3的比例接种传代，必要时需进行细胞计数；

注意更换吸头、吸管，避免细胞交叉污染。”

三人都默不作声，房间里安静得仿佛能听到针掉落的声音。后头的两人目不转睛，生怕漏掉一丝细节……

最终，陈幸打破了宁静：“将新传代的细胞放入二氧化碳培养箱中，培养条件是37℃、5%浓度的二氧化碳。最后再把安全柜收拾收拾，就大功告成啦！”

“有哪一步不清楚的就问我，你们回去花点儿时间，整理一下实验步骤。”陈幸又带两人看了看细胞培养箱，鼓励道，“明天我让你俩都上手试试……”

“走，带你们去看看我养的鼠。”陈幸兴致正浓，“这细胞实验啊，充其量都只是‘体外’数据，只有经‘体内’实验获得的结果，才更具有说服力。”

体内实验，必须得找与人类基因同源性高的哺乳动物开展——“鼠”自然当之无愧，它们也早已是科研界的“宠物”。